elisa檢測試劑盒是判斷機體免疫功能的一個重要指標,因而具有重要的實驗室研究價值,同時還可能在臨床上有諸多實用價值、包括許多疾病的診斷、病程觀察、療效判斷及細胞因子治療監(jiān)測等。細胞因子試劑盒在感染科,腫瘤科等相關科室應用廣泛。
下面為您介紹elisa檢測試劑盒的五大檢測方法:
1、夾心法:分為雙抗體夾心法和雙抗原夾心法,雙抗體夾心法具有高靈敏度、高專一性的優(yōu)勢,但該法只適用于有多個結合位點的抗原檢測,主要用于檢測各種大分子抗原--例如在醫(yī)學檢測中測定HBsAg、HBeAg、AFP等疾病相關的,以及在科研中檢測細胞因子等。由于雙抗體夾心法特異性高,在檢測過程中有時會將樣本和酶標抗體同時加入進行反應,稱為雙抗體夾心一步法,因為操作時間短,在商業(yè)化生產(chǎn)中有很大優(yōu)勢。
2、間接法:使用了二抗增加信號強度,也使抗體的選擇多樣化,然而間接法容易產(chǎn)生交叉反應。間接法只能用于測定抗體,主要用于疾病的診斷,其優(yōu)點是只需要改變包被抗原,酶標抗體是通用的。
3、競爭法:是用樣本中的游離抗體/抗原與固相的酶標抗體/抗原競爭性結合的分析方法。當游離抗體(或抗原)濃度越高,則能與固定抗原(或抗體)結合的酶標抗體(或抗原)就越少,后續(xù)顯色就越淺,即與對照相比,顯色越淺,表示檢測樣本中抗體(或抗原)含量越高。該法特別適合小分子物質(zhì)的檢測也可用于檢測比較不純的樣本,且重復性好,但是檢測的靈敏度和專一性較差。
4、捕獲法:全稱捕獲包被法也稱為反向間接法,主要用于測定血清中某類抗體亞型如IgM。為排除血清中IgG的干擾,用抗IgM抗體包被后用于捕捉樣本中的IgM,然后加入特異性結合抗原進行后續(xù)檢測。捕獲包被法常用于對病毒性感染的早期診斷。
在測定IgM的實驗中常受到類風濕因子(RF,一種能結合多種動物IgG Fc的自身IgM抗體)的干擾,導致假陽性反應。采用F(ab')或Fab片段制備酶標抗體可以消除RF的干擾,這一方法在雙抗體夾心法中也具有同樣的效用。
5、直接法:僅需要抗原和酶標一抗,操作簡便,可避免交叉反應,然而該方法要求酶標一抗有較高的特異性要求,同時也并非所有的一抗適合標記處理。直接法在實際運用中并不多見,它并不能對樣本中抗體進行定量分析,因為樣本中抗體是非酶標抗體,無法進行后續(xù)顯色,但是該法經(jīng)過改進就是競爭法。